本试剂盒适合提取1-5 ml菌液,在碱裂解法裂解细胞的基础上,采用独特的硅基质膜吸附技术和试剂配方,通过离心吸附柱在高盐状态下高效专一的结合溶液中的质粒DNA,每个吸附柱最高可吸附30 μg的质粒DNA,并最大限度的去除蛋白质、基因组、RNA和其他杂质。得到的质粒DNA可直接用于细胞转染、PCR、酶切、测序、连接等生物学实验。
Q1:得率低
A1:菌体中无质粒(需确认质粒未被污染,并确认质粒拷贝数是不是低拷贝质粒,菌液体积小提为1-5 ml,中提为5-15 ml,大提100-300 ml),菌液体积要适当。
A2:大肠杆菌老化(一般甘油保存菌株,需活化后重新培养摇菌进行提取);4°C保存菌液时间过长,建议使用新鲜菌液。
A3:溶液使用不当:使用前若发现Buffer P2、Buffer N3、Buffer PB有沉淀,需在37℃水浴几分钟,恢复澄清后使用。
A4:操作不当:加入洗脱液时,未垂直悬空加入柱膜中间洗脱质粒;加入洗脱液EB后未静止2分钟直接洗脱。
Q2:纯度低
A1:有RNA污染(需确认RNase A是否加入Buffer P1中,加入RNase A的Buffer P1 置于2-8℃保存6个月有效。)
A2:对于含有大量核酸酶的宿主菌,建议用含有去蛋白液的提取试剂盒。(高纯质粒提取试剂盒CW0500)
A3:Buffer PW中使用前是否按要求加入无水乙醇。
A4:质粒点样飘出孔,PW洗涤后晾干2-5分钟彻底去除无水乙醇的残留。
A5:有基因组污染:加入溶液P1、P2后,混匀不要太剧烈,温和地上下颠倒混匀4-6次。